作者：论文好网编辑部

正常对照组RPE细胞在倒置显微镜下观察呈长梭形或三角形为主，胞体不透明,传染科护理副高论文，细胞内可见少许黑色或棕褐色色素颗粒，细胞排列规则、紧密图1A。而在葡萄糖浓度为30mmol/L的DMEM/F12培养液中，细胞胞体变薄，不规则形状细胞增多，形态呈现多样性图1B。加入p38�MAPK特异性阻断剂SB20358010μmol/L预处理30min后，再置于葡萄糖浓度为30mmol/L的DMEM/F12培养液中，细胞形态也有变化，不规则细胞增多图1C。甘露醇组细胞形态与正常对照组相比没有明显变化图1D,艾滋病职称论文。

1.2.2　细胞内ROS产生的检测

冯丽丽,栾洁，傅敏，杨金风

1.2　方法

人视网膜色素上皮细胞cultured human retinal pigment epithelialcells�19，ARPE�19购自ATCC公司，DMEM/F12培养液Gibco公司，胎牛血清FCS，中美合资兰州民海生物，胰蛋白酶Gibco公司，二甲基亚砜DMSO,Sigma公司，四甲基偶氮唑MTT，Sigma公司，SB203580碧云天生物科技，流式细胞仪BDFACSCalibur。

RPE细胞消化后，接种细胞悬液于25cm2 的培养瓶，置于37℃，50mL/L CO2培养箱中培养24h后，按以上分组予以干预，分别培养48h。吸弃培养液，用预冷的PBS洗3min,3次，加入现配的CM�H2DCFDA2.0mL，置于37℃ 50mL/L CO2培养箱中避光孵育30min，吸除染液，PBS洗3次，最后加入PBS1.0mL。流式细胞仪记录各组ROS水平：波长488nm氩离子激光，观察至少50000个细胞，波峰右移，表明ROS含量高。

2　结果

取生长状态良好的ARPE�19细胞，采用上述传代方法消化，制成细胞悬液，计数，以106个/L接种于96孔板，每组设复孔且每孔的细胞数保持一致，加入等量培养液200μL/孔，置于37℃，50mL/LCO2培养箱中培养48h；每孔加入5g/L MTT溶液20μL，置于37℃，50mL/LCO2培养箱中继续培养4h，终止培养，小心吸弃培养液，每孔加入DMSO150μL，室温振荡10min；在酶联免疫检测仪上测定各孔490nm的吸光度A490值绘制生长曲线。

摘要 目的：研究高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜色素上皮retinalpigment epithelium，RPE细胞增生以及活性氧reactive oxygenspecies,ROS生成的影响。方法：体外培养人RPEARPE�19,传染病医学论文，随机分成4组，即正常对照组用含5.6mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，高糖组用30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，高糖+SB203580组用p38�MAPK特异性阻断剂SB20358010μmol/L预处理30min后，再用含30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，甘露醇组渗透压对照组用含5.6mmol/L葡萄糖和24.4mmol/L甘露醇的DMEM/F12培养液。各组培养48h用MTT法检测各组视网膜色素上皮细胞的增生活力，用CM�H2DCFDA荧光染色检测RPE细胞中ROS的产生量。结果：与对照组相比,高糖培养人视网膜色素上皮细胞48h可以导致RPE细胞的损伤，抑制RPE细胞增殖，并使ROS生成增加，在一定程度上，与p38�MAPK途径的激活有关。结论：高糖培养ARPE�19可致细胞损伤,传染病副高职称论文，抑制增殖，并使ROS生成增加。

1　材料和方法

2.1　ARPE�19形态学变化

0　引言
糖尿病视网膜病变diabeticretinopathy,DR是糖尿病严重的并发症之一。高糖是DR的主要致病因素，血糖水平的控制可以影响DR的发生发展已是广泛的共识。近年来的研究表明，氧化应激作为一种病理过程参与了许多严重眼底疾病的发病机制。活性氧reactiveoxygen species, ROS自由基损害在氧化应激中起重要作用。视网膜色素上皮retinal pigmentepithelium，RPE细胞是血�视网膜屏障主要的组成部分，在维护视网膜正常生理功能方面具有重要的作用1。研究发现，高糖可以造成视网膜色素上皮细胞的损伤，影响视网膜外屏障功能2，但其确切的分子机制尚不清楚。p38信号通路p38 mitogen activated proteinkinase,p38�MAPK是一条应激敏感的通路，高糖刺激可以激活p38�MAPK，使其磷酸化表达增加，发挥信号转导作用。我们研究高糖对RPE细胞生长的影响以及与此相关的分子机制，尤其关注高糖对RPE产生ROS的影响，以及p38�MARK通路在此过程中的作用,传染病护理副高职称论文。

1.2.1　增殖活性的测定

KEYWORDS: high glucose; reactive oxygen species; p38 mitogenactivated protein kinase; retinal pigment epithelium cell

1.1　材料

关键词 高浓度葡萄糖；活性氧族；p38丝裂原活化蛋白激酶；视网膜色素上皮细胞

Abstract�AIM: To investigate the effects of high glucosecondition on the proliferation and reactive oxygen speciesROSexpression in cultured human retinal pigment epithelialRPE cellsin vitro.METHODS: Human RPE cells were cultured in vitro anddivided into four groups: control group with DMEM/F12 culturesolution including 5.6mmol/L glucose;high glucose group withDMEM/F12 culture solution including 30mmol/L glucose; high glucoseplus SB203580 group with DMEM/F12 culture solution including30mmol/L glucose plus 10μmol/L SB203580 the specific in hibitor ofp38 mitogen activated protein kinasep38�MAPK; mannitol group withDMEM/F12 culture solution including 5.6mmol/L glucose and24.4mmol/L mannitol. Cell viability was assessed by the MTT assay.ROS change in RPE cells in response to high glucose was detectedwith flow cytometry.RESULTS: Compared to controls , the treatmentof RPE cells with 30mmol/L glucose caused an obviously decrease ofcellar viability. After pretreated with SB203580, cell viabilitywas elevated compared with high glucose group .The ROS increased inhigh glucose group.CONCLUSION: High glucose could damage RPE cells.The mechanisms may be that high glucose could evoke ROS expressionvia p38�MAPK pathway.

ARPE�19悬液置于含有100mL/L FCS的DMEM/F12培养液的培养瓶内，于37℃, 50mL/L CO2培养箱中培养，隔天换液，待细胞长至融合后，用0.5g/L胰蛋白酶�0.2g/L EDTA消化，离心，制成单细胞悬液，按1∶4～ 1∶6传代。将长至融合状态的细胞以0.5g/L 胰蛋白酶�0.2g/LEDTA消化，离心，制成单细胞悬液，置于含5.6mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液中培养24h后弃除培养液，用PBS漂洗2次分成4组，即正常对照组用含5.6mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，高糖组用30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，高糖+SB203580组用p38�MAPK特异性阻断剂SB20358010μmol/L预处理30min后，再用含30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液，甘露醇组渗透压对照组用含5.6mmol/L葡萄糖和24.4mmol/L甘露醇的DMEM/F12培养液，以上各组均培养48h，于倒置显微镜下观察拍照。

统计学分析：实验重复3次，测到的数据采用SPSS17.0统计学软件进行ANONA方差分析和配对t检验，数据以均数±标准差±s表示，以P<0.05为有统计学差异。本文转载于论文好网www.lunwenhao.com论文好网专业代写代发传染病科论文