·设为首页 ·收藏本站业务电话:15812469196,020-22926644  业务QQ:点击这里给我发消息QQ交谈 点击这里给我发消息QQ交谈  业务邮箱:654985325@qq.com
网站公告: 2018年职称评审开始了,论文好网一如既往服务于你们,并给与最大优惠。
护理论文
您当前的位置:首页 - 护理论文
  • 探讨复方丹参注射液对氧化所致损伤的血管内皮细胞的保护作用
  • 浏览 7183 次 【字号 】 发布日期:[ 2009-5-12 ]

  • 摘要:目的:探讨复方丹参注射液对氧化所致损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法采用脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein cells),用倒置相差显微镜和扫描电镜观察各组内皮细胞(endothelial cell, EC)的形态学特点。分光光度计测定细胞上清液中丙二醛的含量。结果扫描电镜观察显示过氧化氢组EC皱缩变小,细胞表面干裂,表面微绒毛减少甚至消失,细胞间隙增宽,而经丹参预处理过的过氧化氢组细胞形态结构则明显改善。MDA含量测定表明过氧化氢组的MDA含量明显增高。相反,正常组和丹参组中MDA含量减少(P<0.01)。结论 复方丹参注射液通过其抗氧化作用,对氧化所引起的受损血管EC有保护作用。

    关键词:复方丹参注射液;血管内皮;扫描电镜

     

    AbstractObjectiveTo study the protective effects of the compound injection of Dan-shen on cultured endothelial cells (EC) injured by oxidization. MethodsThe morphological characteristics of EC in primary cutured human umbilical vein cells (HUVEC) in vitro were ovserved by the inverted microscope and scanning electron microscopy(SEM). The content of MDA in the supernatant fluid of cultured EC cells was detected by spectrophotometry.ResultsIt was observed by SEM that ECs in the H2O2 group were wrinkle and small, cell membrane had split and aperture, the microvillus decreased or disappeared, stiff or broken, and the cell gaps were wide. However, ECs in the Danshen group was similar with the normal group. MDA content obviously increased in the H2O2 group. However, the content of normal and Danshen group decreased. (P<0.01) .ConclusionThe compound injection of Danshen has protective effects on the injured vascular endothelial cells induced by oxidization through antioxidization function,

    Key wordsInjection; Dan-shen;  Vascular endothelial cell; Scanning electron microsopy

        
      心血管疾病是人类死亡的首要原因。在各种心脑血管疾病中,很多都是由动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)而引起。而许多研究表明血管内皮细胞(endothelial cell, EC)损伤是AS发生的始动环节[1]。因此保护血管内皮对防治AS具有重要意义。 本实验通过扫描电镜观察细胞的超微结构,用分光光度法检测MDA含量,以探讨丹参对受损伤的血管EC的保护作用,以及其抗AS的作用机理。

     

    材料与方法

      1.1  药物与试剂复方丹参注射液(含丹参1 g/ml)为上海中西药液股份有限公司产品,批号021001M199培养基为美国GIBCO公司产品;胎牛血清为美国HYCOLONE公司产品;MDA试剂盒为北京邦定公司提供;扫描电镜为日本产品。

      1.2  人脐静脉内皮细胞培养按Jaffe等[2,3]人的方法略加修改进行。在无菌条件下,取健康产妇的脐带, 灌注0.1%型胶原酶(collagenase-10 15 ml,置37水浴中孵育1520 min1 000 r/min离心10 min,沉淀中加入含有20FBS的完全M199培养液5 ml,充分混合制成细胞悬液,以(1.5~2.0×104/cm2密度植入培养瓶中,置375%的CO2培养箱中培养,定期换液,待细胞长成融合状态后进行鉴定及进行实验。

      1.3  实验分组及药物处理实验分为3个组:正常组:加入含20FBS的完全培养液培养;H2O2组:首先加入含20 FBS的完全培养液,待细胞基本融合时再加入终浓度为75 μmol/LH2O2刺激4 h丹参组:加入含20 FBS的完全培养液,培养24 h后,再加入终浓度分别为0.1250.25 1.25 2.5 mg/ml 12.5 mg/ml的复方丹参注射液,继续培养24 h后再加入终浓度为75μmol/LH2O2刺激4 h

      1.4  用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况选用生长良好的HUVEC,制成细胞悬液接种于预置盖玻片的24孔板中,每孔加入(12×105HUVEC,放置于375%的 CO2培养箱内,含20FBSM199培养液中培养。待细胞生长呈亚融合状态后 各组按上述方法处理。取出玻片,放入3%戊二醛固定1 hPBS3次,1%锇酸固定,PBS3次,梯度酒精脱水,用CO2临界点仪进行干燥,用离子溅射仪喷金,日立S3500N扫描电镜观察。

      1.5   丙二醛(MDA)含量测定选用生长良好的HUVEC,制成细胞悬液,以浓度(12×105/ml接种于24孔培养板。每组8个孔,设置7个组。细胞处理同上,终止培养并分别收集所有孔的上清液1 ml,置于20冰箱待测,然后按照北京邦定生物技术有限公司提供的试剂盒说明,用分光光度计检测MDA含量。

      1.6  统计学处理所有实验数据用Excel统计软件进行统计分析。所有数值均以±s表示,组间比较用t检验进行统计学分析。

     

    结果

      2.1  内皮细胞形态学观察在倒置相差显微镜下观察,正常组EC生长旺盛,呈上皮样贴壁生长,细胞呈多角形或长梭形,呈鹅卵石样铺满底层。在75 μmol/L H2O2作用4 h后,细胞间隙增大,胞体变小,细胞收缩变圆,失去细胞间连接,胞浆透明,少数细胞悬浮脱落;随着作用时间进一步延长,胞膜边缘不清楚,部分胞膜不完整,细胞出现空泡和颗粒变性,细胞脱落增多,到将近4 h的时候出现拉网现象。而经丹参预处理过的H2O2EC形态与正常组相似,并且浓度越高越接近正常细胞组。扫描电镜可以观察到正常组(1)EC呈圆形或梭形、多角形,表面微绒毛丰富,排列规则,有光泽,细胞膜完整,细胞间隙较小,细胞连接可见。H2O2(2)EC皱缩变小,细胞表面干裂,胞膜表面有孔隙,有的呈现不规则锯齿状,表面微绒毛减少甚至消失,细胞间隙增大,微绒毛僵直断裂,分布不规则,减少甚至消失,可见微绒毛水肿。而丹参组(3)EC形态结构则明显改善,其形态、大小及微绒毛数量、分布与正常组相似。

      图正常组ECBar=15μm()           

      图2   H2O2ECBar=6μm()           

      图丹参组EC(Bar=30μm)()

      2.2  各组细胞培养液中MDA的检测结果用H2O2 刺激细胞后,细胞培养液中的MDA含量明显升高,而用复方丹参预处理的细胞培养液中的MDA含量与正常组相似。H2O2组与正常组和丹参组比较具有显著性差异(P<0.01)。结果见表1

      表各组内皮细胞中丙二醛含量的比较()

    H2O2组作比较,*P <0.01n=8

  • [1] [2]

业务电话:15812469196,020-22926644 业务QQ:点击这里给我发消息QQ交谈 点击这里给我发消息QQ交谈 业务邮箱:654985325@qq.com

CopyRight(C)2004-2020 广州文豪信息科技有限公司 粤ICP备14052946号-2

所有资料均源于网上的共享资源及期刊共享,请特别注意勿做其他非法用途。

如有侵犯您的版权或其他有损您利益的行为,请联系指出,论文好网会立即删除有关内容!