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清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒黏附、膜融合影响的实验
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【摘要】 方针 研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒黏附、膜融合历程的禁止浸染。体例 应用温度转换的体例，在病毒黏附阶段（温度转换前）和病毒侵入阶段（温度转换后）分袂加入清肺口服液含药血清，监测两个阶段病毒禁止率静静均吸光度(A)值，不雅观察研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒黏拥护膜融合的影响。功效 温度转换实施前，含药血清组平均A值与病毒斗劲组无较着性差别；病毒侵入阶段（温度转换后）的清肺口服液含药血清组病毒禁止率为增多，平均A值较着升高。温度转换实施前后差别有统计学意义。结论 清肺口服液含药血清的抗病毒浸染主要表现在呼吸道合胞病毒黏附后的膜融合及侵入阶段。
【关键词】 清肺口服液/血清学； 呼吸道合胞病毒/中医药疗法； 清热解毒剂； 实施
doi:10.3969/j.issn.16743865.2009.01.016
Experimental study on influence of Qingfei oral liquid medicinecontained serum on adhesion and membrane fusion process of respiratory syncytial virus YUAN Bin*，LIAO Hui，WANG Shouchuan，et al. *Department of Pediatrics,The Affiliated Hospital to Nanjing University of TCM，Nanjing 210029，China
【Abstract】 Objective To study the inhibition effects of Qingfei oral liquid medicinecontained serum on adhesion and membrane fusion process of respiratory syncytial virus. Methods Using the method of temperature conversion，we added Qingfei oral liquid medicinecontained serum during adhesion period(before temperature conversion) and invasion period(after temperature conversion) respectively.Monitor virus inhibition rates and average A of the two periods，observe the influence of Qingfei oral liquid medicinecontained serum on adhesion and membrane fusion process of respiratory syncytial virus. Results No significant differences were found on the average A between Qingfei oral liquid medicinecontained serum group and virus control group before temperature conversion experiment.After the temperature conversion，virus inhibition rates of Qingfei oral liquid medicinecontained serum group increased，the average A increasing obviously.Differences were significant before and after temperature conversion experiment. Conclusion The antiviral effect of Qingfei oral liquid medicinecontained serum mainly embodies on the membrane fusion and invasion phases after adhesion process of respiratory syncytial virus.
【Key words】 Qingfei oral liquid/Serology； RSV/TCM therapy； Heatclearing and detoxifying agents; Expertimental
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncyntial virus，RSV)是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病毒病原［1］。是老年人和免疫禁止患者呼吸道疾病的严重病原［2］，西医对其尚无理想治疗法子。清肺口服液(由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩、葶苈子、炙桑白皮、前胡等组成)为江苏省中病院院内制剂，普遍应用于临床治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎，疗效较好，前期相关研究也批注，清肺口服液含药血清对RSV有禁止浸染［3］，但这种禁止浸染的具体关头尚未得以说明。为此，本研究从病毒的微不美观机关结谈判黏附侵入靶细胞阶段历程的角度出发，计划进行温度转换实施研究。现将研究功效报道如下。
1 质料与体例
1.1 质料 呼吸道合胞病毒A亚型（Long株，广州博特生物工程有限责任公司)；Hep2（人喉癌上皮细胞，布克生物手艺有限公司)；DMEM（美国GIBCO公司）；新生牛血清（杭州四时青公司）；0.25%胰酶（美国GIBCO公司）；MTT（美国AMRESCO公司）；DMSO(上海永华特种化学试剂厂)；酶标仪（美国BioTek公司）。
1.2 Hep2细胞 造就Hep2细胞接纳含10%小牛血清的DMEM造就液，35 ℃、体积分数为0.05的CO2孵箱饱和湿度下通例造就。镜下不雅观察细胞呈不端方多角形，发展状况精巧的细胞每2～3 d传代，0.25%胰酶消化2 min，镜下不雅观察细胞回缩变圆时禁止消化，每次分3～4瓶。全数实施均接纳对数生长期细胞。
1.3 呼吸道合胞病毒液制备及机关造就对折感染量（TCID50）的测定［4］ Hep2细胞以1×108/L接种25 mL造就瓶，每瓶3 mL。将长成单层细胞的造就液倒失踪，接种病毒液，吸附1.5 h。加入适量含2%小牛血清的维持液，连续造就3～5 d。待细胞80%产得病变后，置-80 ℃（至少2 h）和37 ℃一再冻融3次。离心管离心10 min，2 500 r/min。弃沉淀，收集病毒上清液，分装后于-80 ℃保留备用。Hep2细胞以1×108/L接种96孔造就板，每孔100 μL。病毒液用维持液10倍系列稀释8个浓度。细胞长成单层时吸弃造就液，磷酸盐缓冲溶液洗细胞面，接种各稀释度的病毒液，并设正常细胞斗劲组。置35 ℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中吸附2 h，15 min摇摆1次，使病毒平均吸附。吸弃病毒液，每孔加维持液100 μL，置造就箱中连续造就，每日不雅观察病变水平并记实。以最高稀释度不再出现新病变时为绝顶，用ReedMuench公式盘算病毒TCID50。
1.4 含药血清和利巴韦林对细胞最年夜无毒浓度测定 Hep2细胞以1×108/L加入96孔细胞板，每孔100 μL，待长成单层后，加入维持液稀释后的清肺口服液含药血清，每孔100 μL，并设正常细胞斗劲。置37 ℃、体积分数为0.05的CO2造就箱中造就，不雅观察细胞病变至72 h。弃去上清液，用移液器每孔加入MTT（1 g/L）100 μL。置孵箱孵育4 h。吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO 100 μL，振荡，使结晶物充分消融。选择490 nm波长，用酶标仪测定各孔平均吸光度(A)值，确定药物的最年夜无毒浓度。
