【摘要】目的： 探讨凋亡抑制蛋白Survivin在胆管癌组织中的表达及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的关系。方法：应用免疫组织化学方法测定51例胆管癌组织和10例正常胆管组织的Survivin和VEGF的表达水平。结果：1)胆管癌组织中，Survivin阳性表达率为74.5%，正常胆管组织中的阳性表达率为0，两者相比差异有统计学意义(P<0.01);Survivin在胆管癌中的表达与患者的性别和年龄、肿瘤的分化程度和部位、有无淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。2)VEGF在胆管癌组织中的阳性表达率为80.4%，在正常胆管组织中的阳性表达率为20%，两者相比差异有统计学意义(P<0.01); VEGF在胆管癌中的表达与患者的性别和年龄、肿瘤的分化程度和部位无明显相关性(P>0.05)，而与有无淋巴结转移有相关性(P<0.05)，转移组高于无转移组。3)Survivin和VEGF在胆管癌组织中阳性表达的比率均为70.6%，二者的表达密切相关(P<0.01)。结论： Survivin和VEGF在胆管癌的发生、发展、侵袭和转移过程中发挥重要作用，二者在肿瘤血管生成过程中密切相关，为胆管癌的诊断和靶向基因治疗提供新的途径。

　　【关键词】 胆管肿瘤•Survivin•血管内皮生长因子•免疫组织化学

　　Expression of survivin in cholangiocarcinoma and its relation to VEGF

　　SUN Zhi-yong1,2, ZHI Xu-ting1

　　1Department of General Surgery, Qiliu Hospital of Shandong Univeristy (Jinan 250012, China)

　　2Department of General Surgery, Heze People’s Hospital(Heze 274031,China)

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of survivin and VEGF in cholangiocarcinoma and explore its relation with clinicobiological behavior. Methods: Immunohistochemical techique was adopted in detecting the survivin and VEGF expression in cholangiocarcinoma and normal bile duct tissues. 51 samples of cholangiocarcinoma were collected in Qilu Hospital of Shandong University from January 2003 to December 2005 , and served as the test group, and 10 samples of normal bile duct tissues as control group. Results: 1) The expression rate of survivin in cholangiocarcinoma was 74.5%, whereas in normal bile duct tissue was 0%, the difference was markablely significant (P<0.01). The expression of Survivin in cholangiocarcinoma was not significantly associated with sex, age, tumor differentiation, tumor location and lymph node metastasis (P>0.05). 2) The expression rate of VEGF in cholangiocarcinoma was 80.4%, whereas in normal bile duct tissue was 10%, the difference was significant (P<0.01). The expression of VEGF in cholangiocarcinoma was significantly associated with lymph node metastasis (P<0.05), but not with sex, age, tumor differentiation, tumor location (P>0.05) . VEGF expression of the patients with lymph node metastasis was higher than that of group without lymph node metastasis. 3) The expression of both survivin and VEGF, and was 70.6% in the same sample. Conclusion: Survivin and VEGF may play an important role in tumor genesis, tumor progression, infiltration and metastasis of cholangiocarcinoma, and with intimate relation in angiogenesis.

　　【KEYWORDS】 Cholangiocarcinoma•Survivin•Vascular endothelial growth factor•Immunohistochemistry

　　胆管癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤，发病率有逐渐增加的趋势[1]。随着分子生物学的发展，人们已能在基因水平上了解癌基因及相关因子的表达与肿瘤的发生、发展的关系。Survivin是新近发现的一种凋亡抑制基因，属于凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成员，在肿瘤形成过程中与细胞凋亡的抑制、细胞增生及血管生成密切相关，是肿瘤预后不良的标志。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种公认的最重要和最强的促血管生成因子，其在多种肿瘤中高表达，并与肿瘤的浸润、转移和预后不良密切相关。本研究应用SP免疫组织化学方法检测胆管癌组织中Survivin和VEGF的表达，并探讨二者在胆管癌发生、发展和转移过程中的作用。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　选取山东大学齐鲁医院普外科2003年1月—2005年12月临床资料完整的51例胆管癌根治切除术后存档蜡块为实验组，所有组织均经病理组织学诊断为胆管癌，其中男37例，女14例;年龄35～74岁，平均年龄56.1岁;高分化10例，中分化25例，低分化16例;胆管腺癌48例，黏液腺癌1例，黏液细胞癌1例，鳞癌1例;有淋巴结转移21例，无淋巴结转移30例。另取同期10例胆管结石手术患者的经病理组织学检查证实为无癌变的正常胆管组织作对照组。

　　1.2　主要试剂　兔抗人Survivin多克隆抗体、兔抗人VEGF多克隆抗体和即用型免疫组织化学超敏VltrasensitiveTM SP试剂盒均购自福建迈新生物技术开发有限公司。

　　1.3　实验方法　采用VltrasensitiveTM SP免疫组织化学染色法，所有标本均用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片3张，厚度为4 μm。常规脱蜡、水化，抗原修复，内源性过氧化物酶阻断10 min，非免疫性山羊血清室温下孵育10 min。一抗室温下孵育60 min，二抗室温下孵育10 min，链霉素抗生素物素-过氧化物酶溶液室温下孵育10 min。DAB溶液显色5 min，苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

　　1.4　结果判断　Survivin表达以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞;在400倍光学显微镜下至少观察5个视野，阳性细胞数>5%定为阳性表达，≤5%为阴性表达。VEGF表达以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞;阳性细胞数>10%定为阳性表达，≤10%为阴性表达。

　　1.5　统计学处理　采用SPSS11.0统计学软件处理数据。χ2检验用于检验Survivin和VEGF在胆管癌与在正常胆管组织表达的关系，二者的表达与临床病理因素的关系，及二者表达的相关性;Spearman等级相关分析检验用于检验Survivin和VEGF在胆管癌中表达的相关性。P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2　结 果

　　2.1　Survivin和VEGF在两组组织中表达的比较　Survivin在胆管癌组织中的阳性表达率为74.5%，而在正常胆管组织中的阳性表达率为0，两者相比差异有统计学意义(P<0.01);VEGF在胆管癌组织中的阳性表达率为80.4%，而在正常胆管组织中的阳性表达率为20%，两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。

　　2.2　Survivin和VEGF在胆管癌组织中的表达与临床病理因素的关系　Survivin在胆管癌组织中的表达与患者的性别和年龄、肿瘤的分化程度和部位、有无淋巴结转移无明显相关性(P>0.05);VEGF在胆管癌组织中的表达与患者的性别和年龄、肿瘤的分化程度和部位无明显相关性(P>0.05)，但有淋巴结转移组的表达率高于无转移组(P<0.05)。

　　2.3　Survivin在胆管癌组织中的表达与VEGF表达的相关性　在胆管癌组织中Survivin和VEGF均阳性表达的比率为70.6%(36/51))，两者均阴性表达的比率为15.7%(8/51)，经列联表资料的χ2检验和Spearman等级相关分析检验统计学处理证实二者的表达密切相关(χ2=8.9，r=0.678，P<0.01)。

　　3　讨 论

　　细胞凋亡是机体重要的生理过程，对维持内环境稳定有至关重要的意义，细胞凋亡严重失衡对机体具有破坏性影响。促凋亡基因活性受抑制和抗凋亡基因被激活是肿瘤细胞长期存活的主要原因。Survivin是近来经效应细胞蛋白酶受体1 cDNA在人类基因组库的杂交筛选中分离并克隆出来的一种细胞IAP，既具有与IAP其他分子的同源序列，同时又表现出独特的生物学特性。有研究表明Survivin 基因表达具有高度特异性，其在肿瘤组织中广泛表达，且表达水平与肿瘤恶性程度和患者的预后密切相关[2-4]。本研究发现，Survivin在胆管癌组织中的阳性表达率明显高于正常胆管组织中，提示在胆管癌发生发展过程中，Survivin过度表达可抑制胆管癌细胞的凋亡，促进肿瘤细胞分裂、增殖，破坏细胞增殖与凋亡的平衡，大量癌细胞无限制增殖。另一方面，Survivin的高表达也抑制肿瘤血管内皮细胞的凋亡，促进肿瘤血管的生成。Survivin的表达与患者的性别和年龄、肿瘤的分化程度和部位及有无淋巴结转移无明显关系;但随着肿瘤恶性程度的增高，Survivin的表达有逐渐增加的趋势，可以推断Survivin在胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。

　　血管生成是肿瘤生长和转移的必备条件，与肿瘤的发生、发展和转移有着密切的关系。VEGF是一种高度特异性的血管内皮细胞分裂素，被公认为最重要和最强的促血管生成因子，能刺激内皮细胞增殖和迁移，促使肿瘤血管生成[5-6]。本研究发现，胆管癌组织中VEGF的阳性表达率为80.4%，而在正常胆管组织中的阳性表达率为20.0%;VEGF在胆管癌中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度、肿瘤的部位无明显关系，而与有无淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移组的VEGF阳性表达率明显高于无淋巴结转移组，提示VEGF在胆管癌的发生、发展、浸润及转移中也发挥重要作用。Survivin在肿瘤中的高表达同时也抑制肿瘤血管内皮细胞的凋亡，促进肿瘤血管生成，从而促使肿瘤细胞生长[7-9]。本研究结果显示，在胆管癌组织中Survivin和VEGF存在协同表达关系，具有正相关性，提示两者共同作用，既可抑制胆管癌细胞凋亡，又可促进肿瘤血管生成，从而促进胆管癌病变的发展和转移。

　　Survivin仅特异地表达于肿瘤组织，在正常成熟组织中几乎不表达，使得应用Survivin特异性抗体免疫治疗以及反义Survivin基因治疗具有良好的靶向性、特异性和安全性。VEGF及其受体也为肿瘤的药物治疗和基因治疗提供了特异性较高的靶点。Survivin和VEGF的联合检测将为胆管癌的诊断和靶向治疗提供新的途径，针对二者的基因治疗将具有良好的前景。

　　【参考文献】

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